Diabetologia：激活但基本功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出呼吸道自身免疫球蛋白到显现出1型号心血管疾病流行病学副作用的成效率在幼儿初期就有很好的描绘，多个呼吸道自身免疫球蛋白白血病的幼儿里面有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的幼儿这一数量增大到84%。相较之下，占流行病学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的肺癌机制还很难得到充分的研究成果。

愈来愈多的人开始应用于分期系统来定义1型号心血管疾病的成效：有机体在显现出多种呼吸道自身免疫球蛋白时重回第1阶段性，显现出血糖异常时重回第2阶段性，显现出副作用时重回第3阶段性。一些多发呼吸道自身免疫球蛋白白血病的有机体，在1期和2期，成效较较快，并发展为肺癌的1型号心血管疾病。我们之前描绘了一两组在首次检测到多种呼吸道自身免疫球蛋白样本后至少10年无心血管疾病的想像中较快成效者，这两组病症人数少，但特征比较明确。随后，我们发现呼吸道自身复合物特异性CD8+T细胞会底物在成效极快的病症里面基本不长期存在，但在近来肺癌和长期长期存在的心血管疾病病症里面很容易检测到。这显然表明，与成效病症相较，这些病症自身免疫底物的闭环增强。

以前研究成果表明，尽管闭环性T细胞会(Treg)数量显现出异常，但心血管疾病病症长期存在一些机制原因，其里面之外对IL-2的底物并能增大。此外，心血管疾病病症里面的效应CD4+T细胞会显然对闭环更具抵抗性，表现为效应T细胞会的消除移向，自然地消除的Treg和肾脏消除的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞会里面IL-2底物移向。本研究成果的目的是描绘了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在一小群想像中极快成效者里面的特征，他们的里面年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的斜向研究成果，在21岁表列确诊的病症配偶里面检查1型号心血管疾病的凶险因素。我们之前描绘了长期极快成效者的特征，他们保持稳定多重呼吸道自身免疫球蛋白白血病至少10年，但很难显现出心血管疾病的流行病学副作用，较快性或非来外阴自身免疫。随后，10名继续保持稳定无心血管疾病并愿意给予大量血液样本的极快成效者归入T和B细胞会机制量化。在迄今的研究成果里面，8名较快成效者(SP两组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身免疫球蛋白白血病。所有的参与者都处于1型号心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫球蛋白对某些复合物的抽血，然而，一名病症已经处于2期至少6年，但很难显现出流行病学副作用，一名病症被病人为心血管疾病，该成年人72岁，在挖掘实验样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据量化里面对该NADP来进行了单独验证。分离外周血单个核底物细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会法术和T细胞会消除试验验证NADP里面Treg的频带、表型号和机制。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和复出)来进行无指导聚类量化，验证Treg表型号。

结果：与健康NADP相较，来自较快成效体的潜意识CD4+T细胞会的指导聚类揭示，激能活的潜意识CD4+ Treg频带增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关细胞内(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c消退的病症与成效极快者和给定的对照两组相较，Treg谱有所有所不同。机制量化表明，与健康NADP相较，来自极快成效体的Treg介导的CD4+效应T细胞会消除明显受损。表现为对效应CD4+T细胞会CD25和CD134隐含的消除增大。

绘出1 深入的表型号量化揭示，CD4+Treg免疫球细胞内在较快成效链表里面增大。由FlowSOM填充的Treg楼内，有数在来自所有NADP的能活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物隐含断定出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个有所不同Treg上标填充的10个元簇的MST。每个路由器代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在路由器两组周围上色。每个路由器里面的甜品绘出说明单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热绘出，以揭示连续性上标隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)填充绘出，以及FlowSOM比对的每个元簇的较厚。(e-l)相对轻元素为每个metacluster盒该示意绘出(轻元素> 0.05%)考虑到为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。深蓝色白点代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 应用于CITRUS的预测模型号证实，Treg频带的增大是成效极快的标志。分级相关联(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含来进行分离，仿真FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADPSP 606(深蓝色)里面CD25+ cd127的频带核心内容绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联侄集的盒该示意绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被比对为SP和HD链表之间的有所不同。(j)盒该示意绘出揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对轻元素(数量)。(k)直方绘出揭示每个簇的表型号(银色)和Treg上标相对隐含与着重隐含(深蓝色);上列，缓存Treg_3;下面正要，缓存Treg_4。着重与所有其他簇里面上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

绘出3 与健康献血者相较，成效极快者潜意识treg的GITR增大。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热绘出(sp606不之外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR隐含串联，揭示直方绘出(c)和核心内容绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(深蓝色)所有NADP之外，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和给定的HD不之外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，揭示直方绘出(e)和核心内容绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

绘出4 来自极快成效的CD4+ treg细胞会依靠效应CD4+T细胞会的并能增大。SP两组用深蓝色的该线和白点说明，HD两组用银色的该线和白点说明，深蓝色的该线/白点说明NADPsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按观察的数量高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠能再生细胞会，培养3天后来进行流式细胞会法术检测。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培养(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。应用于白血病对照(激能活的响应细胞会不含treg)计算消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 效应CD4+T细胞会对极快成效的T细胞会能再生的消除更敏感。SP两组用深蓝色的该线和白点说明，HD两组用银色的该线和白点说明，深蓝色的该线/白点说明NADPsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按观察的数量高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠能再生细胞会，培养3天后来进行流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因侄量化。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者联合培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除调升(b)。(c,d) CD25消除调升(c)和CD134消除调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们计算出来的事实是，来自极快成效侄的能再生潜意识CD4+Treg在GITR隐含里面得到了扩展和非常丰富，阐释了进一步研究成果Treg在1型号心血管疾病显然性有机体里面的关联性的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28