Diabetologia：激活但功能损毁的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出现去甲自身突变到出现1型式高血压医学症状的的发展率在儿童时期就有很好的描述，多个去甲自身突变阴性的儿童中的有70%在胰岛素转换成后10年末患上高血压，而随访15年的儿童这一数量提高到84%。相比之下，占医学1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的中风机制还没得到确实的研究成果。

越来越多的人开始用到分期系统设计来定义1型式高血压的的发展：个体在出现多种去甲自身突变时离开第1收尾，出现血糖异常时离开第2收尾，出现症状时离开第3收尾。一些多发去甲自身突变阴性的个体，在1期和2期，的发展较慢，并发展为中风的1型式高血压。我们早先描述了一分组在首次扫描到多种去甲自身突变抽取后至不及10年无高血压的极慢的发展者，这分组高血压人数不及，但基本特征非常明确。随后，我们发现去甲自身复合物专一性CD8+T细胞内反应该在的发展较快的高血压中的基本不存在，但在全面性中风和值得注意的高血压高血压中的很容易扫描到。这可能说明了，与的发展高血压相比，这些高血压自身免疫反应该的调控增强。

早期研究成果说明了，尽管调控性T细胞内(Treg)为数也就是说，但高血压高血压存在一些基本功能缺陷，其中的包括对IL-2的反应该灵光阴性提高。此外，高血压高血压中的的现象CD4+T细胞内可能对调控越来越具抵抗性，显出为现象T细胞内的抑止向西移动，自然显现出的Treg和体外显现出的诱发Treg，以及复合物随之而来的CD4+T细胞内中的IL-2反应该向西移动。本研究成果的目的是描述了CD4+调控性T细胞内(Treg)在海岸边极较快的发展者中的的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群蓝本的纵向研究成果，在21岁表列出确诊的高血压亲人中的检查1型式高血压的危险因素。我们早先描述了长期较快的发展者的基本特征，他们依然多重去甲自身突变阴性超过10年，但没出现高血压的医学症状，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续依然无高血压并不愿提供大量血液抽取的较快的发展者纳入T和B细胞内基本功能统计分析。在迄今的研究成果中的，8名慢的发展者(SP分组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身突变阴性。所有的自发性都始终保持1型式高血压的发展的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身突变对某些复合物的过敏原，然而，一名高血压已经始终保持2期至不及6年，但没出现医学症状，一名高血压被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中的对该丝氨酸进行时了基本上评核。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内奥义和T细胞内抑止试验评核丝氨酸中的Treg的频率、表型式和基本功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、相关联和回归)进行时无统筹聚类统计分析，评核Treg表型式。

结果：与健康丝氨酸相比，来自慢的发展体的遗忘CD4+T细胞内的统筹聚类说明了，介导的遗忘CD4+ Treg频率提高，与组胺诱发的TNFR相关蛋白(GITR)传达提高有关。一名HbA1c升高的高血压与的发展较快者和匹配的实验分组相比，Treg小曲有所不同。基本功能已经有，与健康丝氨酸相比，来自较快的发展体的Treg介导的CD4+现象T细胞内抑止明显受损。显出为对现象CD4+T细胞内CD25和CD134传达的抑止提高。

绘出1 深入的表型式统计分析说明了，CD4+Treg亚型式在慢的发展队列中的提高。由FlowSOM生成的Treg会议室，聚集在来自所有丝氨酸的光阴CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物传达比对出10个元簇:遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个空降兵(100个空降兵)，越来越大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器分组外围上色。每个路由器中的的面包绘出表示单个标示的传达级别。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整体标示传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别系统设计的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较丰度为每个metacluster盒本站绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞内(l)。粉红色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组小写秩化验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 用到CITRUS的预测模型式声称，Treg频率的提高是的发展较快的标志。分级奈斯(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的民族特色绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时分离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)分组以及丝氨酸SP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的频率汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯侄集的盒本站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度图例，圆点显眼的簇被识别系统设计为SP和HD队列之间的不同。(j)盒本站绘出说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)分组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较丰度(数量)。(k)直方绘出说明了每个簇的表型式(粉红色)和Treg标示相较传达与背景传达(蓝色);上列，CPUTreg_3;比如说一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的标示的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组小写秩化验

绘出3 与健康献血者相比，的发展较快者遗忘treg的GITR提高。每个遗忘CD4+T细胞内元簇(遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个传达标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon一组小写秩和化验，p< 0.07(粉红色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(蓝色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)串联，说明了直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组小写秩化验

绘出4 来自较快的发展的CD4+ treg细胞内控制现象CD4+T细胞内的灵光阴性提高。SP分组用蓝色的本站和左上方表示，HD分组用黄色的本站和左上方表示，粉红色的本站/左上方表示丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示为CFSE, Treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3在此之后进行时流式细胞内奥义扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者相较应该的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止数量(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止数量。用到阴性解读(介导的响应该细胞内不含treg)计算抑止数量。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 现象CD4+T细胞内对较快的发展的T细胞内再生的抑止越来越敏感。SP分组用蓝色的本站和左上方表示，HD分组用黄色的本站和左上方表示，粉红色的本站/左上方表示丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示，treg按捕捉到的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培植3在此之后进行时流式细胞内奥义(CD25反染)和细胞内因侄统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自较快的发展侄的再生遗忘CD4+Treg在GITR传达中的得到了拓展和丰富，强调了有利于研究成果Treg在1型式高血压风险个体中的的异质性的重要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28